在分子诊断和生命科学领域，定量PCR（qPCR）技术曾长期占据“黄金标准”的地位。但随着精准医学和痕量检测需求的爆发，一种被称为“数字PCR（dPCR）”的新技术正悄然掀起变革。如何将现有的qPCR检测体系平稳过渡到dPCR？本文将为你揭秘升级指南！
qPCR和dPCR：原理对比
qPCR（实时荧光定量PCR）：通过监测荧光信号实时分析PCR扩增过程，依赖标准曲线进行相对定量。适合高浓度样本的快速检测，但对低浓度靶标或复杂背景样本的灵敏度有限。
dPCR（数字PCR）：将样本分割成数万个微滴，在每个“微反应器”中独立扩增，通过统计阳性/阴性信号实现绝对定量。无需标准曲线，精准度提升，尤其擅长检测稀有突变、病毒载量超低样本。
为什么要从qPCR转向dPCR？
灵敏度碾压：dPCR可检测低至1‰的突变频率。
告别标准曲线：直接计算目标分子数，摆脱标准品制备和批次差异困扰。
抗干扰能力强：对抑制剂容忍度更高，适合血液、土壤等复杂样本。
绝对定量需求：如病毒拷贝数测定、转基因成分鉴定等场景必备。
qPCR体系转化dPCR指南
将成熟的qPCR体系转化到dPCR平台其实非常简单！绝大多数情况下只需直接转移即可获得理想扩增效果。如果遇到特殊情况，也只需简单调整以下参数即可解决。
Buffer Mix调整
建议直接使用dPCR专用预混液。
若需要沿用原qPCR体系，通常建议将Taq酶用量提高至1.2-1.5倍，以确保每个微滴内酶的绝对数量足以支持高效扩增。此外，原qPCR体系中含有的影响微滴生成的成分（如高浓度甘油或表面活性剂等），也需微调其比例。
样本浓度梯度
在dPCR实验中，样本需稀释至合适浓度梯度，避免因样本浓度过高导致定量偏差，确保绝对定量的准确性。
引探浓度梯度
若出现非特异性扩增或信号微弱等情况，微调探针浓度，荧光信号变化即可立竿见影。
退火温度梯度
若存在引物二聚体、特殊模板或扩增效率偏低，可设置退火温度梯度（如±2℃范围）进行测试 。
程序时间及循环数
dPCR的程序时间和循环次数相较于qPCR更短，可根据初步实验结果进行调整。
Q
哇！那有没有更简单的体系优化方法呀？
A
当然啦！可以委托我们来做呀！
我们臻准生物以芯片式数字PCR为核心，打造开放型技术平台，兼容多品牌试剂与定制化方案！无需重复开发，依托独创迁移技术，您的qPCR体系可一键升级至dPCR，快速实现绝对定量，数据精准度跃升，效率翻倍！我们更提供专业体系优化服务，从方案设计到数据分析，专家全程护航，助您无缝衔接技术升级，解锁更高科研价值。
客户案例
体系转化服务
实验目的：
使用客户自研的qPCR体系（包括Buffer Mix、引物探针和模板），需转移到臻准生物dPCR平台上。
实验结果图：
臻准生物dPCR芯片原图
如图所示，dPCR芯片无明显杂质，微孔形态正常，体系阳性孔分布均匀，扩增正常。
臻准生物dPCR散点图
臻准生物dPCR浓度梯度图
如图所示，dPCR扩增阴阳性区分明显，复孔间重复性较好，10倍稀释浓度正常。
实验结论：
客户体系已成功转化，客户体系与臻准生物dPCR平台完美兼容。
体系优化服务
实验目的：
客户靶标是单碱基突变，qPCR体系存在非特异性扩增，需优化体系，并转移到臻准生物dPCR平台上。
实验结果图：
如图所示，经过臻准生物工程师体系优化后，已解决非特异性扩增问题，体系可稳定检测1‰突变频率样本。
实验结论：
客户体系已成功优化，客户体系与臻准生物dPCR平台完美兼容。
拥抱精准检测的未来
从qPCR到dPCR的转化不仅是技术升级，更是对“数据可靠性”的极致追求。尽管初期需投入时间和成本优化体系，但在痕量检测、临床诊断等场景中，dPCR的精准优势无可替代。未来，随着微流控芯片成本下降，dPCR或将成为分子检测的“新常态”。你准备好迈入“数字时代”了吗？
关于臻准
臻准生物科技(上海)有限公司2016年成立，总部位于上海环普云创国际科技园。公司作为上海市高新技术企业，致力于生命科学及体外诊断产品的研发生产和销售服务，团队成员来自知名跨国企业和科研院所，专业涵盖微纳加工、精密仪器、软件及算法、生物试剂研发等众多领域。目前，公司推出了具有完整自主知识产权的微腔芯片式数字PCR产品，基于该平台系统，已研发出覆盖肿瘤液体活检、病原感染、遗传检测、核酸药物质控等领域的多种检测试剂盒产品，并与北京大学、复旦大学、浙江大学、上海市计量测试研究院、上海市质量监督检验技术研究院、南京海关等知名院校及企事业单位达成合作。2019年和2022年，臻准生物先后完成数千万元和超亿元融资。